通用名稱：骨切片
用于傳統(tǒng)染色法和培養(yǎng)基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體外精確檢測
骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建?，F(xiàn)已證實，在骨中存在一些特殊物質(zhì)，能夠影響到破骨細胞的活性。因此在北歐生物科技公司，我們使用高質(zhì)骨而不是牙質(zhì)應(yīng)用于研究?，F(xiàn)在將向我們的客戶提供此類服務(wù)。
每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質(zhì)量。在該檢測中，由骨切片上產(chǎn)生凹點證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps 檢測上清液。只有當(dāng)兩項測試都呈陽性時，該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。
破骨細胞產(chǎn)生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對凹點染色方法，亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測法Crosslaps，兩者關(guān)系見圖 1 與 2。由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質(zhì)，而從牛骨切片中提取的蛋白質(zhì)用于 96 孔板，公司開發(fā)了能夠適用于 6，12，24，48 孔板的骨皮質(zhì)切片。如圖 3 所示。
將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質(zhì)片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 µM, B: 30 µM, C: 10µM, D: 0 µM）。第6 天取等量細胞培養(yǎng)上清液用于檢測膠原c 端交聯(lián)肽（ctx）的量（培養(yǎng)基 ELISA-CrossLaps）
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從骨片上轉(zhuǎn)移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點（圖 1）
這種 6 孔板大骨片（GBS）來提取破骨細胞蛋白，這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養(yǎng)，對蛋白質(zhì)的表達是有影響的（數(shù)據(jù)未列出）。要進行破骨細胞的基因描述實驗時，我們推薦使用這些底物提取 RNA。從骨切片分離 RNA 的方案和人破骨細胞的培養(yǎng)方案可根據(jù)要求制定
【來源】
骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，適合 96 孔板，直徑 6mm，大概 200µm 厚。
【儲存】
骨切片保存于 4°C 下 70%乙醇中。為了保持骨切片的質(zhì)量，應(yīng)縮短使用周期和避免室溫下放置。
【處理】
我們推薦在轉(zhuǎn)移至 96 孔板之前，先將骨切片置于含培養(yǎng)基的 10%血清中清洗三次。
【培養(yǎng)】
重吸收實驗一般持續(xù) 72 小時（見圖 2）。然而在加入試劑到破骨細胞培養(yǎng)液中 16 或 24 小時后，就可觀察到細微的變化了，甚至 8 小時后即可用相應(yīng)方法觀察到。
【特征】
與凹點染色和劃線不同，培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps 不要求破骨細胞培養(yǎng)的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品，從而使互換性檢測特定物質(zhì)影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養(yǎng)物的處置相同。
【參考文獻】
1.
HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL164:1537-1545 (2004).
2.
HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).
3. IVASKAET AL. J BIOL CHEM 30;279(18):18361-9 (2004).
4.
KARSDAL ET AL. AM J PATHOL166:467-476(2005).
5.
SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)
6.
STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).
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